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臨床樣本取樣正確與否直接關(guān)系到下游實(shí)驗(yàn)檢測(cè)。很多因素會(huì)影響樣本質(zhì)量，需要格外注意。

實(shí)驗(yàn)組：

三種實(shí)驗(yàn)分別需要不同水平的對(duì)照和流程，需要根據(jù)研究的問(wèn)題設(shè)定流程。

a.科研類(lèi)實(shí)驗(yàn)需要研究外泌體的數(shù)量，大小，exRNA cargo，蛋白質(zhì)組，脂質(zhì)組學(xué)，代謝組學(xué)，糖原組學(xué)和其他的體液特征。尤其在篩選外泌體的亞群的分子標(biāo)記，或者通過(guò)大小結(jié)構(gòu)電荷分離，需要注意實(shí)驗(yàn)應(yīng)具有重復(fù)性。比如應(yīng)減少血小板和中性白細(xì)胞來(lái)源的外泌體。

b.診斷類(lèi)實(shí)驗(yàn)是需要研究疾病進(jìn)程與biormarker特異性和數(shù)量相關(guān)性特征。為了驗(yàn)證特異性和檢測(cè)Marker的相關(guān)性，在外泌體分離時(shí)必須要檢測(cè)特定的臨床病理體液樣本。與目前的診斷手段相比，這類(lèi)研究，能夠提高檢驗(yàn)敏感性，減少費(fèi)用或降低發(fā)病率。

c.制備類(lèi)實(shí)驗(yàn)是為病人制備外泌體的研究。這需要最高水平的標(biāo)準(zhǔn)，即需要保留外泌體的功能，還需要純化的外泌體。

對(duì)照組：

對(duì)照組應(yīng)該與病人（性別，年齡等相符），另外還有很多因素都與外泌體的分泌有關(guān)，包括年齡、性別、種族、體重系數(shù) (body mass index，BMI) 和用藥（比如口服避孕藥）。另外，女性還需要考慮懷孕與否，是否多胎妊娠等?？崭购筒秃鬆顟B(tài)影響血漿脂蛋白和外泌體的水平。另外，患病如感冒也應(yīng)該考慮，因?yàn)榧毙愿腥緯?huì)影響circulating cells 和 RNA。樣本采集前是否進(jìn)行體育鍛煉，是否進(jìn)行過(guò)肝素治療應(yīng)該考慮，因?yàn)闀?huì)影響下游PCR反應(yīng)，影響外泌體與受體細(xì)胞的結(jié)合。

Q:同一樣本的進(jìn)行多次重復(fù)檢測(cè)是否可以用來(lái)做計(jì)算樣本間差異（individual differences）？

A:不可以。同一樣本取樣后分裝，可以用來(lái)驗(yàn)證外泌體的分離效果，RNA提取和后續(xù)檢測(cè)的操作差異性；或者從同一樣本多個(gè)時(shí)間點(diǎn)取樣可以用來(lái)檢測(cè)特定外泌體 marker的時(shí)間差異性。但是還有一種情況就是，同一癌癥病人手術(shù)前樣本和手術(shù)后的樣本是可以配對(duì)的，或者感染前和感染后的同一樣本可以配對(duì)比較。

備注：

年齡

性別

種族

女性：懷孕、妊娠、排卵周期、絕經(jīng)期。

住院（目前）

抗凝治療

肝素治療

肝素類(lèi)似物

阿司匹林

外周靜脈凝血疾病，肺（肺栓塞）

目前用藥清單

抽煙

濫用藥物

每周運(yùn)動(dòng)情況

每天工作或家庭活動(dòng)

堅(jiān)持體育鍛煉<每周3h

堅(jiān)持體育鍛煉>每周3h

睡眠情況

最后的飲食、飲水情況

其他飲食因素